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從細(xì)胞中提取酶，破碎時(shí)間長(zhǎng)會(huì)影響到酶的活性
2015-04-10 09:46:52 來(lái)源：上海旌派超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)
問(wèn)題一：從細(xì)胞中提取酶，破碎時(shí)間長(zhǎng)會(huì)影響到酶的活性，怎么辦？
解析：如果需要的是胞內(nèi)酶，細(xì)胞破碎程度和需要的酶獲得之間基本上有正比關(guān)系。破碎時(shí)間長(zhǎng)的確會(huì)影響到酶的活性。這就需要在*佳的破碎時(shí)間和酶活性之間做出判斷，*直接的辦法是先繪制相關(guān)曲線（酶活性和時(shí)間的關(guān)系曲線）。如果實(shí)驗(yàn)中破碎的是棒狀桿菌（也是很難破壁的G+菌），破碎時(shí)間控制在30min左右，酶活較好。如果是基質(zhì)菌絲的話,好可以考慮用溶菌酶處理一下。
問(wèn)題二：怎樣合理選擇超聲波破碎參數(shù)（條件）？
解析：不同型號(hào)的設(shè)備功率不一樣，功率的大小決定了使用變幅桿的大小范圍（直徑2mm至幾十毫米），你使用多大的變幅桿就在設(shè)備的上調(diào)至該刻度（很簡(jiǎn)單的）！變幅桿的大小決定了處理量。一般情況，5ml以下選3mm，5～50ml可選6～8mm，50ml以上選10mm以上的變幅桿！占空比不用關(guān)心，主要是指超聲時(shí)間和停頓時(shí)間的比值。
問(wèn)題三：為什么用塑料大試管,玻璃的不可以嗎？
解析：不可以的，如果使用玻璃管，可能會(huì)碎裂，而通常使用的是塑料試管。超聲波是物質(zhì)介質(zhì)中的一種彈性機(jī)械波，它既是一種波動(dòng)形式,又是一種能量形式。超聲對(duì)細(xì)胞的作用主要有熱效應(yīng)，空化效應(yīng)和機(jī)械效應(yīng)。熱效應(yīng)是當(dāng)超聲在介質(zhì)中傳播時(shí)，摩擦力阻礙了由超聲引起的分子震動(dòng)，使部分能量轉(zhuǎn)化為局部高熱（42－43℃）。空化效應(yīng)是在超聲照射下，生物體內(nèi)形成空泡，隨著空泡震動(dòng)和其猛烈的聚爆而產(chǎn)生出機(jī)械剪切壓力和動(dòng)蕩。另外，空化泡破裂時(shí)產(chǎn)生瞬時(shí)高溫（約5000℃）、高壓（可達(dá)500×104Pa），可使水蒸氣熱解離產(chǎn)生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化還原反應(yīng)可導(dǎo)致多聚物降解、酶失活、脂質(zhì)過(guò)氧化和細(xì)胞殺傷。機(jī)械效應(yīng)是超聲的原發(fā)效應(yīng)，超聲波在傳播過(guò)程中介質(zhì)質(zhì)點(diǎn)交替地壓縮與伸張構(gòu)成了壓力變化，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷。損傷作用的強(qiáng)弱與超聲的頻率和強(qiáng)度密切相關(guān)。
問(wèn)題四：100g大腸桿菌溶于1L破碎液里（破碎掖：50mMTris-Cl(PH8.5)5mMEDTA0.14MNaCl），攪拌，發(fā)現(xiàn)菌液發(fā)粘，菌體不能夠很好分散，用高壓勻質(zhì)機(jī)破碎，加壓后，菌液不能進(jìn)入勻質(zhì)機(jī)，速度很慢，請(qǐng)問(wèn)是何原因？
解析：能有好的辦法解決，很好用勻質(zhì)機(jī)快速破碎菌體？解析：將破碎液的量加大，不能很好分散可能是量太大；超聲處理5－10分鐘，菌液粘度即可大大降低，也可促進(jìn)菌體分散。
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